HLA-типирование. HLA-типирование при планировании беременности Подготовка к сдаче крови на типирование

HLA - human leucocyte antigens - антигены тканевой совместимости. (cиноним: MHC - major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости).

На поверхности практически всех клеток организма представлены молекулы (белки), которые носят название антигенов главного комплекса гистосовместимости (HLA - антигены). Название HLA - антигены было дано в связи с тем, что эти молекулы наиболее полно представлены именно на поверхности лейкоцитов (клетки крови). Каждый человек обладает индивидуальным набором HLA - антигенов.

Молекулы HLA выполняют роль своеобразных "антенн" на поверхности клеток, позволяющих организму распознавать собственные и чужие клетки (бактерии, вирусы, раковые клетки и т.д.) и при необходимости запускать иммунный ответ, обеспечивающий выработку специфических антител и удаление чужеродного агента из организма.

Синтез белков HLA - системы определяется генами главного комплекса гистосовместимости, которые расположены на коротком плече 6-й хромосомы. Выделяют два основных класса генов главного комплекса гистосовместимости:

• I класс включает гены локусов А, В, С;
• II класс - D-область (сублокусы DR, DP, DQ).

HLA антигены I класса представлены на поверхности практически всех клеток организма, в то время, как белки тканевой совместимости II класса выражены преимущественно на клетках иммунной системы, макрофагах, эпителиальных клетках.

Антигены тканевой совместимости участвуют в распознавании чужеродной ткани и формировании иммунного ответа. HLA - фенотип обязательно учитывается при подборе донора для процедуры трансплантации. Благоприятный прогноз пересадки органа выше при наибольшем сходстве донора и реципиента по антигенам тканевой совместимости.

Доказана взаимосвязь между HLA-антигенами и предрасположенностью к ряду заболеваний. Так, практически у 85% больных анкилозирующим спондилитом и синдромом Рейтера выявлен HLA В27 антиген. Более, чем у 95% больных инсулинозависимым сахарным диабетом определяются HLA DR3, DR4 антигены.

При наследовании антигенов тканевой совместимости ребенок получает по одному гену каждого локуса от обоих родителей, т.е. половина антигенов тканевой совместимости наследуется от матери и половина от отца. Таким образом, ребенок является наполовину чужеродным для организма матери. Эта "чужеродность" является нормальным физиологическим явлением, запускающим иммунологические реакции, направленные на сохранение беременности. Формируется клон иммунных клеток, вырабатывающий специальные "защитные" (блокирующие) антитела.

Несовместимость супругов по HLA-антигенам и отличие зародыша от материнского организма является важным моментом, необходимым для сохранения и вынашивания беременности. При нормальном развитии беременности "блокирующие" антитела к отцовским антигенам появляются с самых ранних сроков беременности. Причем, самыми ранними являются антитела к антигенам II класса гистосовместимости.

Сходство супругов по антигенам тканевой совместимости приводит к "похожести" зародыша на организм матери, что становится причиной недостаточной антигенной стимуляции иммунной системы женщины, и необходимые для сохранения беременности реакции не запускаются. Беременность воспринимается, как чужеродные клетки. В таком случае происходит самопроизвольное прерывание беременности.

Для определения антигенов тканевой совместимости у супругов проводится HLA-типирование. Для проведения анализа берется кровь из вены, и из полученного образца выделяют лейкоциты (клетки крови, на поверхности которых наиболее широко представлены антигены тканевой совместимости). HLA-фенотип определяется методом цепной полимеразной реакции.

Наверно все мы когда-то слышали о донорстве костного мозга (донорстве стволовых клеток), но особо не интересовались что это и для чего нужно. Попробуем разобраться.

Гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) - это клетки нашего организма, с помощью которых происходит так называемый гемопоэз - процесс кроветворения, образования клеток крови.

При тяжелых гематологических, онкологических и генетических заболеваниях методы лечения (химиотерапия, облучение) убивают болезнь, но полностью подавляют функционирование костного мозга, поэтому больномунеобходима трансплантация гемопоэтических стволовых клеток для восстановления кроветворения в организме.

В связи с тем, что процедура трансплантации очень рискованна для пациента (из-за имунного конфликта между клетками донора и реципиента), она проводится только в случаях жизненной необходимости, и врачи каждый раз взвешивают соотношение всех рисков и возможного положительного эффекта. Фактически это последний рубеж.

В качестве источника ГСК для трансплантации используют костный мозг или периферическую кровь, а также пуповинную кровь, собранную после рождения ребенка. Но т.к. хранением пуповинной крови занимаются только коммерческие организации, а использование собственных клеток пуповинной крови желательно лишь в очень редких случаях, основными источниками ГСК остаются костный мозг и периферическая кровь.

Для того, чтобы свести иммунный конфликт к минимуму, донор и реципиент должны максимально совпадать по генетическому набору белков, так называемой HLA-системы. Анализ для определения генетического набора белков называется HLA-типированием. Для проведения такого анализа требуется всего 3-4 мл крови потенциального донора (при некоторых видах HLA-типирования - около 10 мл).

Наибольшие шансы найти донора обычно бывают среди родных братьев и сестер больного: вероятность полной совместимости с братом или сестрой составляет 25%. Если же в семье нет совместимого донора, то ведется поиск неродственного донора. Так как вероятность совместимости со случайно выбранным донором в этом случае очень низка, зачастую необходимо вести поиск среди многих тысяч людей. Для целей такого поиска существуютрегистры потенциальных доноров костного мозга и гемопоэтических стволовых клеток, где хранятся данные о результатах типирования огромного количества добровольцев.

Выше мы упоминали, что основными источниками ГСК у донора являются костный мозг и периферическая кровь.
Клетки костного мозга донора получают путем прокола тазовой кости специальной полой иглой под анестезией, это процедура в целом безопасна и может проводиться даже у маленьких детей. Эта процедура проводится под общей анестезией для тщательного контроля, необходима однодневная госпитализация и, как правило, в местах проколов в течение нескольких дней сохраняются болевые ощущения.

Процедура получения ГСК из крови гораздо проще: специальными препаратами, вводимыми донору в кровь, стимулируется увеличение ГСК в крови, а затем нужные клетки выделяются из крови методом афереза, как при донорстве компонентов крови. При таком методе не нужна анестезия и госпитализация донора. Минусами являются легкие симптомы у донора, отчасти напоминающие грипп и выше вероятность иммунного конфликта донор-реципиент.

Каждый день сотни людей ищут по регистрам данные о донорах ГСК, которые могут спасти им жизнь. Потребность в трансплантациях костного мозга в России - 3000 человек в год. Реальную помощь получают только 5%. Внесите себя в регистр доноров ГСК и быть может именно Вы станете чьей-то последней надеждой на спасение.

Выбирать регистр доноров ГСК лучше всего исходя из того, насколько близко к вашему месту жительства находится точка для прохождения HLA-типирования того или иного регистра. Обратившись в регистры из списка выше, можно получить необходимую информацию о расположении, возможных способах HLA-типирования и порядке вступления.

Если же у вас уже есть данные HLA-типирования, то для регистра достаточно будет предоставить копию бланка, заполнив все необходимые документы.

Тканевая совместимость, типирование, регистры доноров костного мозга

Тканевая совместимость между донором и реципиентом - важнейшее условие успешной аллогенной трансплантации костного мозга. Такая совместимость необходима для того, чтобы минимизировать опасность иммунных осложнений трансплантации, прежде всего тяжелых форм реакции «трансплантат против хозяина».

Иммунные реакции в основном определяются белками, входящими в HLA-систему (от английского Human Leukocyte Antigens - человеческие лейкоцитарные антигены). Генетически определенный набор этих белков на поверхности клеток конкретного организма называется его тканевым типом, а анализ, проводимый для его определения, - типированием.

Сходство между тканевыми типами донора и реципиента и определяется как тканевая совместимость - полная (совпадают все требуемые белки) или частичная. Чем ниже степень совместимости, тем больше риск серьезного иммунного конфликта.

Наибольшие шансы найти донора обычно бывают среди родных братьев и сестер больного: вероятность полной совместимости с братом или сестрой составляет 25%. Если же в семье нет совместимого донора, то либо используются не полностью совместимые родственники, либо ведется поиск неродственного донора. Так как вероятность совместимости со случайно выбранным неродственным донором очень низка, обычно необходимо вести поиск среди многих тысяч людей. Для целей такого поиска существуютрегистры потенциальных доноров костного мозга и гемопоэтических стволовых клеток, где хранятся данные о результатах типирования огромного количества добровольцев. В России единый регистр доноров костного мозга только начинает создаваться, в нем пока сравнительно мало участников, и для поиска неродственных доноров обычно нужно использовать международные регистры. Хотя сейчас уже известны случаи, когда нашим подопечным удается подобрать и российских неродственных доноров.

Донорство костного мозга во всем мире является добровольной и безвозмездной процедурой. Однако при пользовании международными регистрами необходимо оплачивать поиск донора, а также его активацию, то есть проезд, страховку, обследование донора и собственно процедуру забора гемопоэтических стволовых клеток.

Трансплантация стволовых клеток периферической крови

Трансплантация стволовых клеток периферической крови (трансплантация периферических стволовых клеток, ТПСК, ТСКПК) - одна из разновидностей трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (другие разновидности - трансплантация костного мозга и трансплантация пуповинной крови).

Возможность использовать ТПСК связана с тем, что гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) спосообны выходить из костного мозга в кровь, текущую по кровеносным сосудам. Обычно таких клеток в крови очень мало, но можно усилить их выход в кровь под действием гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, Г-КСФ (препараты нейпоген, граноцит, лейкостим) и некоторых других лекарств. Эта процедура называется мобилизацией ГСК. В течение нескольких дней Г-КСФ подкожно вводят донору, после чего нужные клетки можно выделять из крови путем афереза до получения их нужного количества.

При ТПСК, в отличие от трансплантации костного мозга, не нужны анестезия и госпитализация донора. Побочные эффекты от введения Г-КСФ, отчасти напоминающие симптомы гриппа, обычно не слишком сильны и быстро проходят. Однако, по многим данным, использование клеток периферической крови повышает вероятность острой и особенно хронической реакции «трансплантат против хозяина» приаллогенной трансплантации по сравнению с использованим клеток костного мозга.

Трансплантация костного мозга

Трансплантация костного мозга (ТКМ) - одна из разновидностей трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК); другие разновидности - трансплантация стволовых клеток периферической крови и трансплантация пуповинной крови. Исторически именно ТКМ была первым методом ТГСК, и поэтому термин «трансплантация костного мозга» зачастую до сих пор применяется для описания любой трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Разумеется, это не совсем точно, но говорить о «трансплантации костного мозга» большинству людей привычнее и проще, поэтому и в данном справочнике сокращение «ТКМ» часто используется вместо «ТГСК».
Для трансплантации костного мозга необходимо получить клетки костного мозга донора (при аллогенной трансплантации) или самого пациента (при аутологичной трансплантации). Это производится путем прокола тазовой кости специальной полой иглой под анестезией.

Сделав несколько проколов в разных местах, можно набрать достаточный для трансплантации объем костного мозга (требуемое количество зависит от веса реципиента). Это не несет ущерба для здоровья донора, так как забираемое количество составляет лишь несколько процентов от общего объема костного мозга.

Сама процедура забора костного мозга в целом безопасна и может проводиться даже у маленьких детей. Однако в ходе этой процедуры требуется тщательный контроль, как при всяком вмешательстве с использованием общей анестезии. Кроме того, она влечет за собой определенные неудобства, включая необходимость однодневной госпитализации и, как правило, сохранение болевых ощущений в местах проколов в течение нескольких дней.

Кровь – все время вызывала интерес у человека. Она исполняет массу задач, к примеру, питательную, защитную, транспортную и другие.

Сейчас переливание крови (гемотрансфузия) практикуется очень активно, бывают ситуации, в которых это единственный способ спасти жизнь человеку. Восстановление количества крови после кровопотери - это главная цель гемотрансфузии. В основном, к переливанию прибегают при травмах, родах, анемиях, операциях.

Современные изосерологические исследования

Перед переливанием крови проводится типирование крови.На данный момент определение группы крови системы АВО, определение резус-совместимости крови донора и реципиента, определение совместимости групп крови, а также определение резус фактора - относится к обязательным изосерологическим исследованиям. Типирование крови производится для определения совместимости крови донора и реципиента. Сегодня в каждой стране есть банки крови, туда кровь поступает со станций переливания. При этих банках работают специалисты, которые осуществляют полное типирование крови и изучающие все реакции несовместимости.

Определение группы крови делают перед любой операцией, но конкретно перед переливанием подобная процедура крайне важна; это же касается и определения резус фактора. Анализ крови на резус фактор как правило осуществляют совместно с определением группы крови.

Анализ на определение совместимости групп крови проводится после получения всей информации. Донор и реципиент признаются совместимыми, в случае, когда у них не выявилось разрушения эритроцитов либо же склеивания эритроцитов. Во всех других ситуациях надо производить дополнительные изосерологические исследования. Сегодняшние реагенты для проведения изосерологических исследований обладают хорошей степенью точности и надёжности, что позволяет производить гемотрансфузию и хирургические операции с минимальным риском для жизни человека.

Первые попытки гемотрансфузии

Веками размышления на тему использования крови в медицине не имели какой-либо научной базы, хотя специалисты задумывались об этом еще задолго до нашей эры. Только в 17 столетии после многочисленных научных экспериментов специалистам удалось сделать определенный вывод, определивший последующее направление научных поисков. И смысл его в следующем: человеку безопасно переливать исключительно человеческую кровь.

Первым эту процедуру произвел в 1819 году акушер из Англии Бланделл; в России – Вольф. А в 1900 году Карл Ландштейнер - специалист из Австрии сделал открытие групп крови схемы АВО. Позже была выделена еще одна группа крови, не включающаяся в систему К. Ландштейнера, а ученый Янский подтвердил присутствие 4-х групп человеческой крови и создал классификацию. О надобности определения совместимости групп крови непосредственно перед переливанием и типирования крови специалисты задумались в это же время. Тогда гемотрансфузия стала активно применяться, за счет чего были спасены многочисленные люди.

Выявление группы крови

Кровь подразделяется на группы в зависимости от отсутствия либо содержания агглютининов (антител) и агглютиногенов (антигенов). Например, в I группе крови не имеется антигенов, однако включаются антитела А и В. Обладатель этой группы крови - универсальный донор. IV группа имеет агглютиногены А и В, при этом не включает агглютининов, поэтому человек с данной группой крови считается универсальным реципиентом. Но в современной медицине чтобы избежать возможность несовместимости применяют кровь той же группы, как и у реципиента, произведя все нужные изосерологические исследования.

Частой причиной, по которой не наступает беременность и происходит невынашивание беременности - это генетическая несовместимость супругов, точнее, совместимость их по HLA-антигенам.

К примеру, супружеская пара: оба здоровы, а беременности срываются на раннем сроке. Первым делом причину ищут в инфекциях, потом гормонах, далее обследуют на предмет аутоиммунных заболеваний (красная волчанка и т.д). После этого пару направляют в генетический центр, где сдается анализ на генетическую совместимость - HLA-типирование.

Что означает анализ на генетическую совместимость HLA-типирование?

HLA (human leucocyte antigens) - антигены тканевой совместимости, то есть: в нашем организме преимущественно на поверхности клеток крови есть такие белки, называются антигены. У каждого человека свой индивидуальный набор этих HLA-антигенов. Анализ на генетическую совместимость определяет, какие антигены имеют супруги. В идеале, они должны иметь разные HLA-антигены. Если происходит сходство по нескольким HLA-антигенам, то это может быть причиной прерывания беременности или ненаступления беременности.

Белки HLA нужны для определения: "своя" это клетка или "чужая". Если это чужие клетки, например, бактерии, то запускается иммунный ответ, благодаря чему уничтожаются чужие антигены. Это защитная функция организма.

Почему происходит выкидыш при генетической совместимости или не наступает беременность?

Ребенок при наследовании антигенов тканевой совместимости наследует половину антигенов от мамы, а половину от папы. Антигены должны быть разные! Вследствие этого ребенок, наполовину мамин, а наполовину папин. Тогда, организм женщины понимает, что это беременность, и запускает иммунологическую реакцию на сохранение беременности. Эти чужие клетки зародившегося ребенка воспринимаются как чужие, но материнский организм их не атакует, потому что вырабатываются защитные антитела для ребенка. Поэтому совместимость (когда разные антигены) по HLA-антигенам крайне важна при беременности для вынашивания малыша.

Когда антигены родителей совпадают, то женский организм воспринимает беременность, как свои клетки, поэтому не запускается в достаточной мере иммунологическая реакция на защиту ребенка. Плод становится незащищенным от атаки материнской иммунной системы. Это становится причиной невынашивания беременности и выкидыша. По этой же причине у некоторых пар не наступает долгожданная беременность.

Что представляет собой анализ HLA-типирование?

Для проведения анализа на HLA-типирование необходимо супругам сдать кровь из вены. Из сданного материала выделяются лейкоциты, так как на них лучше представлены HLA-антигены. Исследование проводят методом цепной полимеразной реакции. Результат анализа выдаст расшифровку, сколько совпадений у супругов. Консультацию проводит генетик. Даже если есть совпадения, это не конец, на сегодняшний день существует терапия, которая помогает зачать и сохранить беременность.

Что делать при генетической совместимости по HLA-антигенам?

Беременности при генетической несовместимости сохраняли еще 30 лет назад. Тогда брали кусочек кожи у супруга и подшивали ее беременной. Вся атака иммунной системы матери шла на чужеродный лоскут кожи, а не на ребенка. Также чистилась кровь различными препаратами, и подавлялся материнский иммунитет. Сейчас дело обстоит лучше. Медицина продвинулась вперед.

Существуют определенные методики и препараты, которые помогают, как забеременеть при генетической совместимости, так и выносить, сохранить ребенка. Эта проблема не единична. Дети в таких семьях рождаются нормальными, полноценными. Хотя врачи могут предупреждать, что у детей может быть ослаблена иммунная система.

Главное для такой пары найти хорошего специалиста, который бы вел их с момента зачатия и до родов. При этом нужно выполнять все требования врача. Без медикаментозного сохранения беременности таким супругам не обойтись.

Почему происходит генетическая несовместимость, сказать сложно. Главное не расстраиваться и идти к цели - иметь детей. Все возможно!

В феврале 2016 в нескольких городах России проходила акция «Спаси жизнь ребенку с лейкозом», организованная «Русфондом» и медицинской лабораторией «Инвитро». Ее участники сдавали кровь на типирование, чтобы войти в Национальный регистр доноров костного мозга.

Когда нужна трансплантация костного мозга

Трансплантация костного мозга (ТКМ) используется, прежде всего, при лечении онкологических заболеваний, таких как лейкозы, поражения лимфатической системы, нейробластома, а также при апластической анемии и ряде наследственных дефектов крови.

Не следует думать, что больному «меняют» его костный мозг на чей-то еще. На самом деле пациент получает внутривенно гемопоэтические стволовые клетки здорового человека, которые восстанавливают способность организма к кроветворению. Эти клетки могут развиваться, превращаясь в эритроциты, лейкоциты и тромбоциты.

Самым неприятным моментом во всей процедуре забора костного мозга является анестезия, считают врачи. Уровень гемоглобина снижается незначительно. Костный мозг восстанавливается приблизительно месяц. Болезненные ощущения в спине проходят через несколько дней.

Второй способ – получение кроветворных клеток из периферической крови. Предварительно донору дают препарат, «выгоняющий» нужные клетки из костного мозга. Затем из вены берут кровь, она проходит через прибор, разделяющий ее на компоненты, гемопоэтические стволовые клетки собираются, а остальная кровь возвращается в организм через вену на другой руке. Для отбора нужного количества клеток вся кровь человека должна несколько раз пройти через сепаратор. Процедура продолжается пять-шесть часов. После нее донор может испытывать симптомы, похожие на недомогание при гриппе: боли в костях и суставах, головные боли, иногда повышение температуры.

Как попасть в регистр

Донором может стать любой человек в возрасте от 18 до 50 лет, если у него не было гепатитов В и С, туберкулеза, малярии, ВИЧ, нет онкологического заболевания или диабета.

Если вы решили стать потенциальным донором костного мозга, то сначала надо сдать 9 мл крови на типирование и подписать соглашение о вступлении в регистр. В случае, если ваш HLA-тип подойдет какому-нибудь больному, нуждающемуся в ТКМ, то вам предложат пройти дополнительные обследования. Безусловно, вы должны будете подтвердить свое согласие выступить в роли донора.

На сайте «Русфонда» опубликован список лабораторий, где можно сдать кровь, чтобы оказаться в Национальном регистре доноров.

Где в России проводят ТКМ

В России трансплантацию костного мозга проводят всего в нескольких медицинских учреждениях: в Москве, Санкт-Петербурге и Екатеринбурге. Количество специализированных коек ограничено, как и число квот на бесплатное лечение.

ФНКЦ «Детская гематология, онкология и иммунология» им. Дмитрия Рогачева Миндзрава РФ ежегодно делает до 180 пересадок гемопоэтических стволовых клеток у детей.

Институт детской гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой в Санкт-Петербурге в 2013 году, по данным «Коммерсанта» , провел 256 таких процедур по квоте и 10 платных, в 2014 году Минздрав выделил этому учреждению в общей сложности 251 квоту.

В Свердловской областной детской клинической больнице № 1 с 2006 года было сделано немногим более 100 трансплантаций костного мозга, а в Свердловской областной клинической больнице № 1 (для взрослых) на 2015 год было запланировано всего 30 ТКМ.

Что касается количества специализированных коек, то в Институте им. Горбачевой, например, их 60, а в Свердловской областной детской клинической больнице № 1 - 6.

Между тем, по данным благотворительного фонда «Подари жизнь» , ежегодно в трансплантации костного мозга в России нуждается не менее 800-1000 детей - не считая взрослых.

Если лечиться за свои деньги, то оплата одного только койко-дня в отделении трансплантации гемопоэтических стволовых клеток института им. Рогачева обойдется как минимум в 38500 рублей. В целом же стоимость ТКМ в Москве, по данным компании Мед-Коннект, может доходить до 3 миллионов рублей, а в Санкт-Петербурге - до двух миллионов рублей.

За лечение в Германии приходится платить до 210 тысяч евро, а в Израиле - до 240 тысяч долларов. И все это без учета поиска донора в Международном регистре, который выльется еще в 21 тысячу евро. В России этот поиск оплачивают, как правило, благотворительные фонды - такие как «Русфонд», «Подари жизнь», «AdVita».