Раздавленная капля. Исследование морфологических свойств микробов Метод раздавленной капли

Микроскопические одноклеточные организмы, называемые «микробы», а также некоторые бактерии, например, колиформные (формой напоминающие палочки) в огромном количестве содержатся в воде, особенно если она из природных источников - заросший и илистый пруд, ручей, лужа, речные заводи. Рассмотрим, как приготовить препарат «раздавленная капля», данный опыт считается простым и подходит в качестве начального обучения ребенка или начинающего биолога азам микроскопирования.

Препаратом называется подготовленная специальным образом для детального исследования на микроскопе биологическая ткань, микроорганизмы, субстрат. Изучение осуществляется на клеточном уровне, при этом функционирование органов или органоидов может быть остановлено действиями исследователя с применением фиксаторов. Неотъемлемой составной частью микропрепарата являются предметные и покровные стекла, между которыми он заключается для придания биоткани максимального плоского состояния, повышающего эффективность фокусировки на большом увеличении. Склеиваются стеклянные поверхности при помощи капли воды или бесцветной прозрачной пихтовой смолы. Пузырьки воздуха удаляются, края склейки протираются промокашкой. Если микропрепарат приготовлен для временного использования, стеклышки подлежат тщательной промывке, а отработанный образец уничтожению.

Последовательность, необходимая для приготовления препарата раздавленная капля , а также используемые инструменты:

Регистрация результатов наблюдения может происходить глазами или путем фотографирования. Для этого понадобится цифровая камера-окуляр, вставляющаяся вместо обычного в окулярную трубку и подключающаяся к компьютеру через последовательный порт USB. В этом случае картинка будет транслироваться на мониторе, пользователю будут доступны функции измерения размеров и углов, графическая обработка и фотосъемка.

Микромир, невидимый невооруженным зрением, способен впечатлить взрослых и детей, проявляющих интерес к науке. Микроскопия для многих становится не только элементом общеобразовательного процесса, но и увлекательным хобби. На что еще можно посмотреть в микроскоп, как делать микропрепараты с насекомыми, клетками лука, тонкими растительными срезами - вы можете прочитать в познавательных статьях и обзорах в тематическом блоге (раздел «Интересно»). Свои вопросы рекомендуем присылать в обратной связи или по электронной почте.

Испытуемую суточную буль­онную культуру бактерий в количестве 0,5 мл вносят в про­бирку с расплавленным и охлажденным до 45° С 0,7% мясо-пептонным агаром, перемешивают и равномерно распреде­ляют по поверхности 2% мясо-пептонного агара в чашке Петри.

После застывания агара чашку слегка подсушивают в термостате, затем стеклянное дно чашки делят на квадраты, надписывают номера (или названия) фагов, которые будут использоваться для типирования. Переворачивают чашку, приоткрывают крышку и на обозначенные квадраты пастеров­ской пипеткой наносят по одной капле соответствующих надписи фагов.

После суточной инкубации просматривают чашку, отмечая те квадраты, в которых имеется лизис бактерий.

Фаготип бактериальной культуры определяется тем типом (типами) фага, который вызывает ее лизис.

Занятие № 6

Генетика бактерий Изучение бактерий в живом состоянии

Приготовление препарата по методу “раздавленной” капли и его микроскопия.

Приготовление препаратов для изучения микроорганиз­мов в живом состоянии.

Метод «висячей» капли. Ис­пользуют стекла с лункой и покровные стекла. Края по­кровного стекла смазывают вазелином, а в центр наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло лункой вниз прижимают к покровному стеклу, так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движе­нием переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Используя малый сухой объектив 8х, находят край капли, затем устанавливают объектив 40х и микроскопируют.

Метод «раздавленной» капли.

На поверхность чистого предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покров­ным стеклом. Капля должна быть небольшой и не выходить за края покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом 40х или 100х (с иммерсией).

Прижизненная (витальная) окраска. Взвесь микро­бов вносят в каплю 0,001% раствора метиленового синего или нейтрального красного. Затем приготавливают препарат «висячей» или «раздавленной» капли и микроскопируют.

Этапы приготовления препарата «раздавленная капля»

На середину обезжиренного предметного стекла нанесите петлей 1-2 капли бульонной культуры.

Осторожно покройте каплю чистым покровным стеклом.

Микроскопируйте с приспущенным конденсором. Используйте объективы с увеличением 40 х.

Можно также использовать иммерсионный объектив 100х, нанося на покровное стекло одну каплю иммерсионного масла.

При исследовании живых бактерий следует отличать активную подвижность у отдельных микроорганизмов, свидетельствующую о наличии у них жгутиков, от пассивного броуновского движения (движение бактерий в одном направлении).

Занятие № 7

Экология микроорганизмов Изучение микрофлоры ротовой полости

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

Приготовление мазка из зубного налета, окраска простым методом, микроскопия и зарисовка препарата.

Приготовление мазка из зубного налета

На обезжиренное предметное стекло нанесите петлей каплю физиологического раствора.

В правую руку возьмите деревянную палочку (зубочистку) и проведите ею между зубами и у основания зубов, снимая небольшое количество зубного налета.

Погрузите палочку в каплю физраствора, равномерно распределите зубной налет по стеклу и приготовьте мазок в виде небольшого круга (d2см).

Прожгите в пламени спиртовки конец палочки, потушите и выбросьте ее в урну.

После полного высушивания зафиксируйтемазок.

Раздавленная капля - это способ наблюдения живых микроорганизмов в микроскоп. На середину предметного стекла наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала, ее осторожно накрывают покровным стеклом, чтобы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха. Капля должна заполнять все пространство между стеклами л не выступать за края покровного стекла. Иногда, если препарат нужно рассматривать длительное время, края покровного стекла предварительно смазывают вазелином. Препарат можно окрасить, осторожно добавив к нему петлей разведенный краситель. См. также Бактериологическое исследование, Микроскопическая техника.

Раздавленная капля - это метод приготовления препаратов для микроскопического изучения живых объектов. Применяется при исследовании бактерий, клеток культуры тканей, простейших, ряда водорослей и других мелких организмов.

Для приготовления препаратов по методу раздавленной капли на поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды, физиологического раствора или культуральной жидкости. Стеклянной палочкой или бактериологической петлей в каплю вносят небольшое количество исследуемой культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной взвеси. При работе с культурой тканей на предметное стекло наносят каплю суспензии клеток в культуральной жидкости. Если суспензия клеток слишком густая, предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. Для этого обычно к 4,5 мл воды, физиологического раствора или среды для роста добавляют 0,5 мл суспензии клеток и тщательно перемешивают. Этим достигается десятикратное разбавление исходной суспензии. При необходимости можно получить более высокие разведения (1:100-1:1000 и т. д.); приготовленную каплю накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха. Если часть жидкости выступает за края покровного стекла, излишек среды можно отсосать узкой полоской фильтровальной бумаги.

Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах. Для получения наибольшего контраста применяют темнопольную или фазово-контрастную микроскопию. Так как при этом чаще всего необходима двойная иммерсия (объектива и конденсора), толщина препарата не должна превышать 1,1-1,3 мм. Неокрашенные организмы выглядят под микроскопом обведенными светлой или темной (в зависимости от фокусировки) полоской (линия Векке), возникающей на границе преломления среды и тела.

Помимо изучения неокрашенных бактерий, простейших и т. д., метод раздавленной капли позволяет применять методы прижизненной окраски. В качестве красителя широко используют 0,1% водный раствор нейтрального красного. См. также Микроскопическая техника.

Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.

Культуры для приготовления препарата.

Материалы для исследования и техника взятия

Вопросы для рассмотрения

1. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Под редакцией Егорова Н.С. МГУ, М. 1995г. Стр. 81-97, 20-28.

2. Коротяев А.И., Бабичев С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. «Спец. литература». Санкт-Петербург, 1998. Стр. 14-18.

3. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. «Колос», М. 1972. Стр. 5-23.

ТЕМА: Приготовление микроскопических препаратов и их окраска.

1. Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.

2. Приготовление мазков и их фиксация.

3. Красители, используемые в микробиологии.

4. Простые и сложные методы окраски.

Задание для выполнения лабораторной работы

1. Приготовить фиксированный препарат из молодой культуры дрожжей, окрасить его в течение 2-3 мин метиленовым синим и микроскопировать без иммерсии.

2. Приготовить фиксированный препарат из почвенной суспензии, окрасить по методу Грама, микроскопировать его и зарисовать.

3. Выполнить схематическое изображение клеточной стенки грамотрицательных и грамположительных прокариот.

Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки, колбы или чашки Петри бактериологической петлей, обоженной в пламени спиртовки или стерильной пипеткой.

Пробирку с бактериальной культурой берут в левую руку, а петлю за петледержатель в правую. Правой рукой вращательным движением вынимают из пробирки ватную пробку, зажимая ее между мизинцем и ладонью, а края пробирки обжигают в пламени спиртовки. Осторожно вводят петлю в пробирку, охлаждая ее о внутреннюю поверхность стекла, после чего легким скользящим движением берут материал. Затем вынимают петлю из пробирки, снова обжигают ее край и ватную пробирку и закрывают пробирку. После приготовления препарата петлю обязательно прожигают (стерилизуют) в пламени спиртовки.

Для исследования живых клеток микроорганизмов применяют методы «раздавленной и висячей капли». В обоих случаях возможно окрашивание объекта “прижизненными” красителями – “витальная” окраска.

На чистое предметное стекло наносят каплю воды. В каплю вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному. Капля должна быть небольшой, не выходящей за края покровного стекла, но если суспензия попала за край - удаляют фильтровальной бумагой. Микроскопируют препарат с объективом 40Х. Метод удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также просмотра крупных объектов - плесневых грибов, дрожжей. Применяют при изучении запасных веществ клетки. Метод “висячей” капли – используются для длительных наблюдений за клетками микроорганизмов. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь её дна или края. Для микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8Х, под увеличением которого находят край капли, а затем устанавливают иммерсионный объектив.

Прижизненная (витальная) окраска. Взвесь микроорганизмов вносят в каплю раствора метиленового синего или нейтрального красного в концентрациях от 0,001 до 0,00001%. Затем готовят препарат по одному из выше указанных методов и микроскопируют. После микроскопии препараты, «раздавленной» или «висячей» капли опускают в дезинфицирующий раствор.

Каждая женщина хочет быть привлекательной, нравиться себе и окружающим её людям. С возрастом оставаться в форме становится сложнее: появляются морщинки, кожа обвисает, теряет блеск и увлажнённость. Многие женщины в погоне за вечной молодостью практически «живут» в косметологических салонах, клиниках, подвергая себя и своё тело бесчисленным процедурам. Зачастую в результате они выглядят только хуже, а исколотое, например, ботоксом лицо становится неподвижной «маской». Стоит ли красота таких жертв? Сомневаемся. К счастью, косметология не стоит на месте, появляются разные процедуры, которые не причиняют вреда. Среди них — .

Это подкожные инъекции, которые омолаживают кожу, не причиняя ей вреда. Это неудивительно, ведь название процедуры в переводе означает «естественное возвращение жизни». Биоревитализация гиалуроновой кислотой не оставляет на коже травм и абсолютно безопасна. Кроме того, коже не нужно будет тратить время на восстановление.

Гиалуроновая кислота содержится в естественном виде содержится в организме человека, однако с возрастом её становится меньше. Именно поэтому наша кожа начинает увядать, теряет упругость. Поэтому косметологи придумали вводить под кожу искусственную гиалуроновую кислоту.

Показания к процедуре биоревитализации

Биоревитализация вам необходима, если:

• у вас есть проблемы после пластических операций;
• имеются пигментные пятна;
• ваша кожа увядает и теряет блеск.

Почему Вискодерм?

Линейка препарата Вискодерм

Препарат Вискодерм — детище итальянской компании IBSA, одного из производителей гиалуроновой кислоты. В отличие от аналогов, этот препарат совершенно безвреден. Он делается из искусственной гиалуроновой кислоты, поэтому не вызывает аллергии. Поэтому вы можете без страха применять Вискодерм, чтобы омолодить кожу. Эффект от процедуры заметен сразу, поэтому отзывы о Вискодерме положительные.

Линейка препаратов Вискодерм, состав, показания к применению

Вискодерм 0,8%

В геле содержится 8 миллиграммов гиалуроновой кислоты. Рекомендуется для решения следующих проблем:

• омоложение кожи вокруг глаз;
• коррекция, а также профилактика кожного старения;
• истончившаяся, лишенная влаги кожа;
• коррекция последствий угревой сыпи, рубцов и небольших растяжек;
• удаление дефектов кожи лица, вызванных курением и стрессами.

Вискодерм 1,6%

Такая концентрация геля содержит 16 миллиграммов гиалуроновой кислоты и рекомендуется для:

• устранения сухости кожи;
• коррекции кожных изменений, связанных со старением, особенно после 30-40 лет;
• удаления излишней инсоляции;
• подготовки к агрессивным косметическим процедурам (химический пилинг);
• омоложения рук, шеи, зоны декольте, лица;
• увеличения эффективности контурной пластики губ при помощи гиалуроновой кислоты.

Вискодерм 2 %

В геле с таким названием содержится 20 миллиграммов гиалуроновой кислоты. Он используется для:

• коррекции старения сорокалетней кожи;
• заполнения глубоких морщинок и сладок кожи;
• омоложения тяжелой толстой кожи.

Эти виды препарата Вискодерм относятся к основной линейке. Также выпускается ещё три типа, которые отличаются большей дозировкой.

Вискодерм Bi 0,8%

• 8 миллиграммов гиалуроновой кислоты (один шприц объёмом 2 миллилитра).

Вискодерм Trio 1,6%

• биоревитализация большой кожной поверхности.
• 16 миллиграммов гиалуроната натрия (три шприца по 1,5 миллилитра).

Вискодерм Maxx 2%

• биоревитализация изменений кожи, связанных с возрастом, на большой площади
• 20 миллиграммов гиалуроновой кислоты (один шприц объёмом 2,5 миллилитра).

Способы введения Вискодерма

Препарат вводится специальным шприцем с тонкой иглой. В зависимости от цели, которую преследует клиент, выбирается концентрация Вискодерма. Они были разработаны специально для работы на разной глубине.

• Вискодерм 0,8% вводится в верхний слой кожи, эпидермис. Он освежает цвет лица, насыщает кожу влагой, избавляет от первых морщинок.
• Вискодерм 1,6% работает в поверхностном слое дермы и помогает клеткам кожи обновиться, восстановиться.
• Вискодерм 2% вводится очень глубоко, в самую дерму. Он решает наиболее серьёзные проблемы, связанные со старением кожи, утратой упругости.

Противопоказания

Препарат Вискодерм, несмотря на его безопасность, нельзя применять в следующих случаях:

• возраст моложе двадцати пяти лет (в этом случае косметологи советуют мезотерапию);
• беременность и период кормления малыша грудью;
• имеются нарушения свертываемости крови;
• аллергия на анестетики или препараты, в состав которых входит гиалуроновая кислота;
• возникновение келоидных и гипертрофических рубцов;
• онкологические, инфекционные и аутоиммунные болезни, заболевания соединительной ткани.

Проведение процедуры

Первым делом место, куда будет вводиться Вискодерм, смазывается обезболивающей мазью на тридцать минут. Если у пациента высокий болевой порог, то можно обойтись и без анестетика. По истечении срока крем смывается, кожа обрабатывается антисептиком, чтобы исключить возможность заражения.

Техника проведения биоревитализации зависит, в первую очередь, от концентрации Вискодерма, а также от места укалывания. Выделяется три способа введения препарата под кожу:

• Папульная техника используется для неглубокого введения Вискодерма с концентрацией 0,8% и 1,6%.
• Линейная техника предназначена для разглаживания морщин и более серьёзных проблем, связанных с кожей. В этом случае используется Вискодерм 2%.
• Техника «раздавленной капли» используется для биоревитализации кожи вокруг век. Благодаря этому методу отёки, которые особенно заметны в этой области, исчезают гораздо быстрее.

Сколько длится один сеанс биоревитализации?

Это зависит от площади, которую необходимо обколоть инъекциями Вискодерма. В среднем, процедура занимает полчаса, если косметолог работает только с лицом, и около часа, если требуется уколоть также шею, декольте, кисти рук и другие участки кожи. После окончания процедуры места уколов обязательно обрабатываются антисептиком.

Уход за кожей после инъекций Вискодерма

Чтобы не инфицировать места введения уколов, следует придерживаться следующих правил:

• три-четыре дня не ходить в бассейн;
• первые 48 часов лучше вообще не краситься;
• не пользоваться кремами два-три дня;
• не мазать на уколотые части тела лекарственные мази и препараты для удаления синяков.

Чтобы отек после процедуры не усилился:

• четыре дня не занимайтесь спортом;
• не ходите в сауну и не загорайте;
• лишний раз не наклоняйтесь, особенно не работайте в таком положении.

Побочные эффекты после введения Вискодерма

• покраснение кожи в месте укола на два-три дня;
• зуд, жжение и покалывание первые пару дней;
• небольшой отёк, который исчезнет через двое суток;
• синяки и гематомы от четырёх дней до недели;
• фиброз ткани.

Цена процедуры

Стоимость одного сеанса биоревитализации Вискодермом зависит от степени его концентрации.

0,8% – 7-8 тысяч рублей;

1,6% – 8-13 тысяч рублей;

2% – 10-15 тысяч рублей.

Большинство косметологических клиник предлагают скидки при отплате сразу нескольких сеансов. Таким способом можно сэкономить 10-15%.

Фото до и после

Предлагаем вашему вниманию фотографии до и после процедуры биоревитализации Вискодермом. Вы сможете наглядно убедиться, что эффект от неё действительно налицо! Посмотрите, какой кожа была до процедуры, и как она «ожила» и посвежела после. Если вы всё ещё думаете, стоит ли попробовать на себе препарат Вискодерм, надеемся, что фотографии помогут вам принять решение.